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2021-07-29
研究人員發(fā)現(xiàn)，盡管大腦通過(guò)中腦產(chǎn)生5-羥色胺的神經(jīng)元來(lái)調(diào)節(jié)快感和饑餓感的進(jìn)食，但每種進(jìn)食方式都是由自己獨(dú)立的電路連接的，不影響其他類型的進(jìn)食方式。美國(guó)疾病控制與預(yù)防中心(CentersforDiseaseControlａndPrevention)的數(shù)據(jù)顯示，無(wú)論是由饑餓還是愉悅引起的暴飲暴食，通常都會(huì)導(dǎo)致肥胖。美國(guó)約42%的成年人都患有肥胖癥。一個(gè)由貝勒醫(yī)學(xué)院(BaylorCollegeofMedicine)的研究人員領(lǐng)導(dǎo)的國(guó)際研究小組在動(dòng)物模型上研究了大腦是如何調(diào)節(jié)饑餓或其...2021-07-29
基本原理：外源目的DNA與載體分子的連接稱為DNA重組，重組的DNA稱為重組體或重組子。研究中需要克隆或表達(dá)的基因?yàn)橥庠碊NA，載體是指能夠攜帶外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞，并在其中進(jìn)行擴(kuò)增或誘導(dǎo)外源基因表達(dá)的工具，其中質(zhì)粒載體最為常用。質(zhì)粒是獨(dú)立于細(xì)菌染色體外具有自我復(fù)制的DNA分子。所有的質(zhì)粒都有復(fù)制子、選擇性標(biāo)志和多克隆位點(diǎn)3個(gè)共同的特性。質(zhì)粒載體的選擇包括載體的大小、載體拷貝數(shù)、多接頭以及篩選插入片段的能力，pcDNA3.1（+/-）是比較常用的真核表達(dá)載體?；静襟E：1、目...2021-07-29
CCK8全稱CellCountingKit-8，是一種基于WST-8（化學(xué)名為2-（2-甲氧基-4-硝基苯）-3-（4-硝基苯）-5-（2,4-二磺基苯）-2H-四唑單鈉鹽）的應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度檢測(cè)試劑盒。其工作原理類似于MTT，在電子耦合試劑存在的情況下，WST-8可以被線粒體內(nèi)的脫氧酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）。顏色的深淺與細(xì)胞的數(shù)量有關(guān)。CCK8法在藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)、腫瘤藥敏試驗(yàn)以及生物因子的活性檢...2021-07-28
基本原理細(xì)胞凍存時(shí)保存細(xì)胞的最基本方法，當(dāng)不加保護(hù)劑直接凍存細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水會(huì)形成冰晶，從而引起細(xì)胞死亡。因此，正常情況下凍存細(xì)胞，通常會(huì)向培養(yǎng)液中加入保護(hù)劑，使用逐步降低溫度的方法，以減少凍存過(guò)程中細(xì)胞內(nèi)冰晶形成、保護(hù)細(xì)胞。注意事項(xiàng)1、凍存細(xì)胞選擇細(xì)胞增殖旺盛、情況穩(wěn)定、無(wú)污染、處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞。2、實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程必須遵循無(wú)菌操作。3、細(xì)胞凍存液的配方應(yīng)根據(jù)細(xì)胞的類型進(jìn)行調(diào)整，摸索對(duì)應(yīng)細(xì)胞最適的配方。4、細(xì)胞凍存過(guò)程，降溫速率要小，遵循慢凍原則，可借助程序降溫...2021-07-27
41、跑電泳的時(shí)候配的膠總是“縮”是什么原因呢？是有的成分不對(duì)嗎？答：沒(méi)什么問(wèn)題，就是你膠里的水分被蒸發(fā)了。過(guò)夜時(shí)拿保鮮膜包起來(lái)，在里面加點(diǎn)水保持濕度就可以了；也可能母液（30%聚丙酰胺）有問(wèn)題，你可以重新配制一份觀察；能夠替換的試劑，盡量換一下，選用好的試劑。42、蛋白質(zhì)的分子量跨度很大，如要分離小21KD，中至66KD，大至170KD，可以一次做好嗎？答：這么廣的分布不好轉(zhuǎn)移，一般建議：21kd和66kd可以一起轉(zhuǎn)，12％SDS-PAGE，濕轉(zhuǎn)120mA，45-60min...2021-07-27
Westernblot實(shí)驗(yàn)過(guò)程中常見(jiàn)問(wèn)題匯總及處理方案。21、想分離的蛋白是分子量200kd的，SDS-PAGE電泳的分離膠濃度多大合適？濃縮膠的濃度又該用多少？這么大分子量的蛋白容易作WesternBlot嗎？答：分離膠用7％，濃縮膠3.5％，200kd的蛋白不好做。22、如果上樣量超載，要用什么方法來(lái)增加上樣量？答：可以濃縮樣品，也可以根據(jù)你的目標(biāo)分子量透析掉一部分小分子蛋白。一般地，超載30％是不會(huì)有問(wèn)題的。如果已經(jīng)超了不少了，而且小分子量的也要，可以考慮加大膠的厚度，...2021-07-27
Westernblot實(shí)驗(yàn)過(guò)程中常見(jiàn)問(wèn)題匯總及處理方案。1、westernblot的優(yōu)點(diǎn)及缺點(diǎn)答：優(yōu)點(diǎn)：靈敏，特異性高，常規(guī)可達(dá)ng級(jí)，Ecl顯色法理論上可達(dá)pg級(jí)。缺點(diǎn)：通量有限。2、為什么我的細(xì)胞提取液中沒(méi)有目標(biāo)蛋白？答：原因有很多：首先排除WB過(guò)程是不是抗體的問(wèn)題，重新實(shí)驗(yàn)、更換抗體；其次排除蛋白是否降解，提取的時(shí)候需要加入蛋白酶抑制劑，a)你的細(xì)胞中不表達(dá)這種蛋白質(zhì)，換一種細(xì)胞；最后考慮此種細(xì)胞是否表達(dá)該蛋白，表達(dá)量高低。3、提取液有的有沉淀，有的很清亮，為什么呢？答...- 移液器
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